Md_Mic

Présentation

 Modes opératoires 

 Ex.A.O. ~ Lycée / Micrélec 

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Sujet / thème / niveau utilisation :
T. P. Ex.A.O. [Chaîne d'acquisition Micrélec ORPHI-GTS] (Seconde, Première S, Terminale S).


Auteur(s) :    groupe Ex.A.O. Aquitaine


Contact :    James.Lauchas@ac-bordeaux.fr   


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  Mode opératoire Micrélec

 Sommaire de la page

1 . Métabolisme humain
2 . Réaction de Hill
3 . Respiration cellulaire
4 . Métabolisme endothermes~ectothermes
5 . Nerf de crabe
6 . EMG, réflexe achiléen
7 . Cinétique enzymatique oxymétrie (catéchol)
8 . Cinétique enzymatique oxymétrie (glucose~G.O.D.)
9 . Paramétrage du logiciel "REGORPHY"
10 . Cinétique enzymatique photocolorimétrie (gaïacol)
11 . Photosynthèse
12 . Spectre absorption chlorophylle
13 . Gibbérelline (Option Sc. exp.)
 
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Mode opératoire Micrélec

1. Métabolisme humain [logiciel METHOR]

 
Schéma du montage 
  Principe de la Manip. 
 
 
 

Mode opératoire.

expbul2a.gif (128 octets) Paramétrage du logiciel. 
 
expbul3a.gif (272 octets) Lancer le logiciel METHOR
expbul3a.gif (272 octets) Choisir l'option 6 : CHOIX ET ETALONNAGE : 6 /Etalonnage / 1 Etalonnage / 1 pour étalonner, suivre les instructions affichées à l'écran.
expbul3a.gif (272 octets)A la fin étalonnage : 3 Retour à menu Choix / 5 menu principal.
expbul2a.gif (128 octets) Première mesure au repos.
expbul3a.gif (272 octets) Entrer la durée (1 min), la masse (en Kg), la taille (en cm).
expbul3a.gif (272 octets) Ajuster l'oxymètre (bouton PENTE du module) à 21%.
expbul3a.gif (272 octets) Position assise ; ne pas regarder l'écran ni les personnes autour de vous (car cela perturbe la respiration). Serrer l'embout du tube souple avec les lèvres. Respirer le plus normalement possible par la bouche de manière à ce que la totalité de l'air rejeté (expiré) passe dans le circuit de mesure.
expbul3a.gif (272 octets) Lancer la mesure une fois que la respiration est stabilisée. A la fin de la mesure, entrer le nombre de flexions (ici 0), puis option S(auve) / Changement de répertoire (N) ; donner un nom au fichier (8 caractères sans espace, [exemple :METREP**]).
expbul2a.gif (128 octets) Deuxième mesure avec flexions.
expbul3a.gif (272 octets) Entrer la durée (3 mn), la masse (en Kg), la taille (en cm).
expbul3a.gif (272 octets) Entrer la durée (3 min). Ajuster l'oxymètre (bouton PENTE du module) à 21%.
expbul3a.gif (272 octets) Position debout ; ne pas regarder l'écran ni les personnes autour de vous (car cela perturbe la respiration). Serrer l'embout du tube souple avec les lèvres. Respirer le plus normalement possible par la bouche de manière à ce que la totalité de l'air rejeté (expiré) passe dans le circuit de mesure.
expbul3a.gif (272 octets) Lancer la mesure une fois que la respiration est stabilisée. Au bout de 30 secondes placer un R(epère) sur le graphe et commencer les 20 flexions. Ne pas oublier de les compter ! A la fin des flexions, placer un nouveau R(epère). Continuer à respirer par l'embout.A la fin de la mesure, entrer le nombre de flexions (ici 20), puis option S(auve) / Changement de répertoire (N) ; donner un nom au fichier (8 caractères sans espace, ex. : METEF***).
expbul2a.gif (128 octets) Impression des résultats.
expbul3a.gif (272 octets)  Editer les graphiques obtenus sur imprimante. [option C(harge) (pour récupérer les fichiers), changement de répertoire (N) puis I(mprime].
 
 

Procédure d'après manipulation :

 
expbul2a.gif (128 octets) Désinfecter le matériel utilisé dans une solution d'alcool et d'eau de Javel.
expbul2a.gif (128 octets) Mettre l'embout à sécher à la lumière (pour éviter les moisissures).
 
Sommaire  
 
 

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Mode opératoire Micrélec

2. Réaction de Hill (logiciel PHOTOR) :

 
Schéma du montage 
  Principe de la Manip. 
 
 
 

Mode opératoire.

 
expbul2a.gif (128 octets) Paramétrage du logiciel.
expbul3a.gif (272 octets) Option 6 : REGLAGES du menu CHOIX pour étalonnage des capteurs (suivre indications apparaissant à l'écran).
expbul3a.gif (272 octets) Introduire 5/20 ml de broyat cellulaire chrorophyllien dans le réacteur. Mettre en place le bouchon (de telle façon que la surface de la suspension affleure le bouchon) avec la sonde oxymétrique, ou le piston du bioréacteur. Lancer l'agitation. Préparer la seringue à injection en aspirant 0,1/1 ml de réactif de HILL.
expbul3a.gif (272 octets) Option 4 : retour au menu CHOIX.
expbul2a.gif (128 octets) Mesure.
expbul3a.gif (272 octets) Option 7 : retour au menu principal.
expbul3a.gif (272 octets) Option 1 : MESURES.
- Durée = 10 min ; largeur histogramme : valider.
- Mesure O2 (O/N) : O ; confirmer O.
- Utilisation de filtres colorés = N.
- Allumer la lampe ou le projecteur. Couvrir le montage afin de commencer la mesure à l'obscurité.
- C(ommencer) pour lancer la mesure.
expbul3a.gif (272 octets) Au bout d'1 min, enlever le cache.
expbul3a.gif (272 octets) Au bout de 2 min, injecter 0,1/0,5 ml de réactif de HILL dans le réacteur à l'aide de la seringue à injection. Placer un R(epère) en tapant R au clavier au moment de l'injection.
expbul3a.gif (272 octets)Au bout de 5 min couvrir à nouveau le réacteur.
expbul2a.gif (128 octets) Sauvegarde et impression des résultats.
expbul3a.gif (272 octets) Sauvegarde : option S(auve) / Changement de répertoire (N) ; donner un nom au fichier (8 caractères sans espace, ex. : hill***).
expbul3a.gif (272 octets) Impression : I(mprimer)
 
 

Procédure d'après manipulation :

 
expbul2a.gif (128 octets) Rincer soigneusement tous les éléments du réacteur ainsi que la seringue à injection.
expbul2a.gif (128 octets) Rincer soigneusement la tête de la sonde O2 et placer cette tête dans un tube contenant de l'eau distillée.
 
 

Remarque :

 
expbul2a.gif (128 octets) On peut utiliser deux types de réacteur avec la chaîne Micrélec :
expbul3a.gif (272 octets) Bioréacteur de Jeulin sur lequel on adapte la sonde à l'aide d'un manchon,
expbul3a.gif (272 octets) Cytoréacteur de Pierron, ou réacteur "maison".
expbul2a.gif (128 octets) Le bioréacteur à une chambre de volume 5 ml. Les quantités à utiliser sont donc les premières indiquées. Les autre céacteurs ont une chambre de volume 15 à 20 ml. Les quantités à utiliser sont les dernières indiquées.
expbul2a.gif (128 octets) D'autre part, il faut tenir compte de ces volumes lors de la préparation des produits de préparation du broyat et du réactif. 5 g de feuilles de lis correspondent à 2 feuilles.
 
Sommaire  
 


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Mode opératoire Micrélec

3. Respiration / Photosynthèse cellulaire (logiciel PHOTOR) :

 
Schéma du montage 
  Principe de la Manip. 
 
 
 

Mode opératoire.

 
expbul2a.gif (128 octets) Paramétrage du logiciel.
expbul3a.gif (272 octets) Lancer le logiciel PHOTOR. * Option 1 : MESURES.
expbul3a.gif (272 octets) Données à entrer : durée = 6 min. Largeur histogramme : valider. Mesure O2 (O/N) : O. Confirmer O. Utilisation de filtres colorés = N.
expbul2a.gif (128 octets) Première mesure.
expbul3a.gif (272 octets) Bioréacteur1 :
- Placer la sonde O2 au fond du réacteur sans "visser".
- Prélever 6/7 ml de suspension de végétaux unicellulaires à l'aide de la grosse seringue à cathéter (prélever au fond du bêcher pour avoir une concentration plus forte) et verser cette suspension dans le réacteur.
- Mettre en place le piston en prenant soin que le liquide emplisse le cône creusé à sa base (ne pas laisser d'air entre la surface de la suspension et le piston).
- Mettre en marche l'agitateur. Sa vitesse de rotation devra rester constante pendant toute la mesure.
- Fixer le capteur luxmètre à la cuve du bioréacteur1, la fenêtre du capteur tournée vers la lampe.
- Allumer la lampe et la placer le plus près possible de la cuve du réacteur [la lampe devra rester allumée durant toute la mesure].
- A l'aide du bouton décalage du module oxymétrique, placer le curseur au 1/3 inférieur de l'écran.
- Ne lancer la mesure qu'au bout de 2/3 mn, en vérifiant que la valeur affichée (curseur sur côté gauche de l'écran) de la [O2] se soit stabilisée. Pour lancer la mesure, appuyer sur la C(ommencer) ou valider.
- Au bout de trois minutes, relever la lampe sans l'éteindre et placer le cache sur le réacteur.
- Fin de la mesure : sauvegarder le fichier sur disque [option S(auve) / Changement de répertoire : N], en donnant un nom de huit caractères, sans espace, puis, option A(utre) / S(uperposition).
expbul3a.gif (272 octets) Cytoréacteur :
- Prélever 15/20 ml de suspension de végétaux unicellulaires à l'aide de la grosse seringue à cathéter (prélever au fond du bêcher pour avoir une concentration plus forte) et verser cette suspension dans le réacteur.
- Placer un barreau aimanté dans le réacteur (attention à ne pas le perdre !]
- Placer la sonde O2 avec le bouchon dans le liquide du réacteur (attention à ne pas enlever la membrane) et vérifier que la tête de la sonde plonge bien dans la suspension. Mettre en marche l'agitateur. Sa vitesse de rotation devra rester constante pendant toute la mesure.
- Fixer le capteur luxmètre près du réacteur en le tournant vers la source de lumière.
- Allumer la lampe et la placer le plus près possible du réacteur [la lampe devra rester allumée durant toute la mesure].A l'aide du bouton décalage du module oxymétrique, placer le curseur au 1/3 inférieur de l'écran.
- Ne lancer la mesure qu'au bout de 2/3 mn, en vérifiant que la valeur affichée de la [O2] se soit stabilisée. Pour lancer la mesure, appuyer sur la barre espace.
- Au bout de trois minutes, relever la lampe sans l'éteindre et placer le cache sur le réacteur.
- Fin de la mesure : sauvegarder le fichier sur disque [option S(auve) / Changement de répertoire : N], en donnant un nom de huit caractères, sans espace, puis, option A(utre) / S(uperposition).
expbul2a.gif (128 octets) Deuxième mesure.
expbul3a.gif (272 octets) Nettoyer le réacteur comme indiqué sur sa fiche, et rincer la seringue.
expbul3a.gif (272 octets) Reprendre pas à pas la mode opératoire précédent.
expbul3a.gif (272 octets) Fin de la mesure : sauvegarder le fichier sur disque [option S(auve)/Changement de répertoire : N], en donnant le même nom de fichier. Confirmer pour écraser l'ancien fichier huit caractères, sans espace, puis, option A(utre) / S(uperposition).
- Placer la sonde O2 au fond du réacteur sans "visser".
- Prélever 6/7 ml de suspension de végétaux unicellulaires à l'aide de la grosse seringue à cathéter (prélever au fond du bêcher pour avoir une concentration plus forte) et verser cette suspension dans le réacteur.
expbul2a.gif (128 octets) Impression des résultats.
expbul3a.gif (272 octets) Option N(otes) pour légender les graphes, puis I(mprime) pour imprimer le graphe.
 
 

Procédure de fin de manipulation :

expbul2a.gif (128 octets) Rincer la tête de sonde O2 et la replacer sur son support 
expbul2a.gif (128 octets) Nettoyer le réacteur (turbulent !!!) la seringue… Ranger le poste et passer un coup d'éponge sur la table.  
 
 
Sommaire  
 


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Mode opératoire Micrélec

4. Métabolisme endothermes ectothermes [logiciel RESPOR] :

 
 

Matériel et mesures pour asticots, vers de terre.......

 
 
Schéma du montage 
  Principe de la Manip. 
 
expbul2a.gif (128 octets) Enceinte = boite de diapos ; remplir la boite aux 2/3 d’asticots.
expbul2a.gif (128 octets) Mesure 1 : enceinte dans glaçons (asticots sortant de réfrigérateur). Mesure 2 : température ambiante. Mesure 3 : enceinte dans eau à 40 °C.
 
 

Matériel et mesures pour souris, hamster.......

 
 
Schéma du montage 
  Principe de la Manip. 
 
expbul2a.gif (128 octets) Enceinte = boite adaptée à la taille de l'animal, et dans laquelle la sonde O2 est bien protégée des dents du rongeur ! ; remplir la boite aux 2/3 d’asticots.
expbul2a.gif (128 octets) Mesure 1 : enceinte dans glaçons (on peut placer le rongeur lui-même au réfrigérateur pendant 10 à 20 min.)
expbul2a.gif (128 octets) Mesure 2 : température ambiante.
expbul2a.gif (128 octets) Mesure 3 : enceinte dans eau à 40 °C maximum
 
 

Mode opératoire.

 
expbul2a.gif (128 octets) Paramétrage du logiciel.
expbul3a.gif (272 octets) Lancer le logiciel PHOTOR. * Option 1 : MESURES.
expbul3a.gif (272 octets) Données à entrer : durée = 5 min. Largeur histogramme : valider. Mesure O2 (O/N) : O. Confirmer O. Utilisation de filtres colorés = N.
expbul2a.gif (128 octets) Première mesure.
expbul3a.gif (272 octets)  Placer l'enceinte dans les conditions définies par le protocole
expbul3a.gif (272 octets)   Mettre en place la sonde oxymétrique dans l'enceinte, puis assurer l'étanchéité.
expbul3a.gif (272 octets) Attendre 2 à 3 minutes avant de lancer la mesure, que la sonde soit à la température de l’enceinte (ne lancer la mesure que lorsque le curseur est stabilisé).
expbul3a.gif (272 octets) C(ommencer) pour lancer la mesure.
expbul3a.gif (272 octets) Fin de la mesure : option C(onserver) le tracé, puis sauvegarder [option S(auve)] ce fichier sur disque [changement de répertoire : N(on) ; donner un nom [8 caractères maximum (PS6*****)]].
expbul2a.gif (128 octets) Mesure(s) suivante(s). Attention, ne pas oublier que la sonde O2 est très sensible à la température. Chaque mesure doit donc être effectuée à température constante.
expbul3a.gif (272 octets)  Placer l'enceinte dans les conditions définies par le protocole, placer la sonde oxymétrique dans l'enceinte. Assurer l'étanchéité.[suivre le mode opératoire de la première mesure].
expbul3a.gif (272 octets)  Option A(autre) / S(uperposer).
expbul3a.gif (272 octets)  A la fin de chaque nouvelle mesure, sauvegarder le fichier [option S(auve), entrer le même nom de fichier, pour écraser l'ancien.
expbul2a.gif (128 octets) Impression des résultats.
expbul3a.gif (272 octets)  Vérifier que l'imprimante a du papier bien positionné, qu'elle est "on line", et que le boîtier de partage est bien réglé.
expbul3a.gif (272 octets)   Editer le graphique [option Sortie / Imprimante].Ajouter deux lignes de commentaire si nécessaire.
 
 

Procédure de fin de manipulation :

expbul2a.gif (128 octets) Enlever la sonde O2 de l'enceinte et la rincer soigneusement ; nettoyer l'enceinte ainsi que tout matériel utilisé dans la manipulation.  
 
 
Sommaire  
 


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Mode opératoire Micrélec

5. Nerf de crabe [logiciel PHYNEURO] :

 
Schéma du montage 
  Principe de la Manip. 
 
 
 

Extraction et mise en place du nerf :

 
expbul2a.gif (128 octets) Extraction :
expbul3a.gif (272 octets)  Prélever par torsion 1 patte entière (pas les pinces). Saisir les deux segments de l'extrémité entre pouce et index, de façon à détacher partiellement la patte à partir du 3ème segment (mouvements ant/post et d/g, ou section partielle aux ciseaux. [cf schémas ci-dessous]. Ensuite, tourner la patte de 1/4 de tour environ et tirer doucement, de manière à ne pas arracher le nerf. Placer les deux segments et le nerf dans une boîte de pétri contenant de l'eau de mer filtrée, et laisser reposer la préparation 10 à 15 mn. (Il est conseillé d' extraire 3 ou 4 nerfs).

expbul3a.gif (272 octets)  Pour éviter de "traumatiser" le nerf, on peut obliger le crabe à réaliser une autotomie de sa patte. Pour cela, il faut serrer fortement, mais sans écraser, à l'aide d'une pince, entre le 2è et le 3è segment, jusqu'à ce que le crabe détache lui-même sa patte, comme il le fait au cours de combats avec ses congénaires.

expbul2a.gif (128 octets) Mise en place du nerf dans la cuve :
expbul3a.gif (272 octets)  Placer 1/2 cm d'eau de mer au fond de la cuve. Vérifier que cette eau n'atteint pas les électrodes.
expbul3a.gif (272 octets)  Placer le nerf sur les électrodes, en vérifiant qu'il repose sur toutes les électrodes branchées à l'interface.
expbul3a.gif (272 octets)  Ne pas trop humecter le nerf, car le manchon d'eau de mer qui se forme est fortement conducteur du courant de stimulation. Cela donnerait un artéfact très important, perturbant l'enregistrement du potentiel global.
 
 

Paramétrage du logiciel :

 
expbul3a.gif (272 octets) Lancer le logiciel PHYNEURO.
expbul3a.gif (272 octets) Placer le nerf sur les électrodes, en vérifiant qu'il repose sur toutes les électrodes
 
 

Potentiel global du nerf [Notion de Seuil, Amplitude, Durée]

 
expbul2a.gif (128 octets) Paramétrage du logiciel.
expbul3a.gif (272 octets)  [Choisir calibre 2,5 V sur module/AMP1 ; mettre en marche le module (voyant rouge allumé],
expbul3a.gif (272 octets)  Option 1 : MESURE du menu principal
expbul3a.gif (272 octets)  Choix des paramètres : Durée=10 ms ; Nombre excitations = 1 ; Déclenchement par le clavier ; Nombre enregistrements simultanés = 1.
expbul3a.gif (272 octets)  (c)A(libre) (A) : choisir 2,5 V (valeur affichée sur module)
expbul3a.gif (272 octets)  Bouton décalage : placer la flèche au milieu de l'écran, si on veut travailler en superposition de graphes, sinon placer le curseur vers le haut de l'écran (et le décaler vers le bas pour les autres enregistrements [voir graphiques correspondants]
expbul2a.gif (128 octets) Mesures.
expbul3a.gif (272 octets)  Première mesure : intensité 0,5 V. Option A(utre) pour superposer. Décaler le curseur si nécessaire.
expbul3a.gif (272 octets) Mesures suivantes : augmenter intensité de 0,5 V jusqu'à 3V par pas de 0,5V.
expbul3a.gif (272 octets)  Option 1 : MESURE du menu principal.
expbul2a.gif (128 octets) Sauvegarde et impression.
expbul3a.gif (272 octets) Sauvegarde : option S(auve)
expbul3a.gif (272 octets)expbul3a.gif (272 octets) Impression : I(mprimer). Possibilité de légender les graphes et de modifier le titre (option N(otes)).
 
 

Période réfractaire : [Choisir calibre 2,5 V sur module/AMP1 ; mettre en marche le module (voyant rouge allumé)]

 
expbul2a.gif (128 octets) Paramétrage du logiciel.
expbul3a.gif (272 octets) Option 1 : MESURE du menu principal,
expbul3a.gif (272 octets) Choix des paramètres : Durée = 20 ms ; Nombre stimulations = 2 ; Déclenchement par le clavier ; Nombre enregistrements simultanés = 1.
expbul3a.gif (272 octets) (c)A(libre) (A) : choisir 2,5 V (valeur affichée sur module)
expbul3a.gif (272 octets) Bouton décalage : placer la flèche au milieu de l'écran.
expbul2a.gif (128 octets) Mesures.
expbul3a.gif (272 octets)  Première mesure : intensité=3V ; délai=0,5ms.Intervalle : 10 ms Option A(utre) pour superposer
expbul3a.gif (272 octets) Mesures suivantes : diminuer l'intervalle entre les deux stimulations par pas de  2 ms s jusqu'à 2 ms.
expbul2a.gif (128 octets) Sauvegarde et impression.
expbul3a.gif (272 octets) Sauvegarde : option S(auve)
expbul3a.gif (272 octets) Impression : I(mprimer). Possibilité de légender les graphes et de modifier le titre (option N(otes)).
 
 

Vitesse du potentiel global [Si la longueur du nerf le permet]

 
 [Cette détermination nécessite la possession d'un 2ème cordon relié à 2ème série d'électrodes réceptrices et à AMP2 du module électrophysiologie. Choisir calibre 2,5 V sur module/AMP1 et AMP2 et mettre en marche module. Mais elle peut également se faire à partir des enregistrements précédents, par détermination de D distance et D temps (V= D d/D t)]

expbul2a.gif (128 octets) Paramétrage du logiciel.

expbul3a.gif (272 octets) Option 1 : MESURE du menu principal,
expbul3a.gif (272 octets) Choix des paramètres : Durée=10 ms ; Nombre stimulations = 1 ; Déclenchement par le clavier ; Nombre enregistrements simultanés = 2.
expbul3a.gif (272 octets) (c)A(libre) (A) : choisir 2,5 V (valeur affichée sur module)
expbul3a.gif (272 octets) Bouton décalage : placer la flèche au milieu de l'écran
expbul3a.gif (272 octets) MESURE : intensité=2V
expbul2a.gif (128 octets) Sauvegarde et impression.
expbul3a.gif (272 octets) Sauvegarde : option S(auve)
expbul3a.gif (272 octets) Impression : I(mprimer). Possibilité de légender les graphes et de modifier le titre (option N(otes)).
 
 

Procédure de fin de manipulation :

 
expbul2a.gif (128 octets) Rincer soigneusement à l'eau distillée tout le matériel ayant été en contact avec l'eau de mer.
expbul2a.gif (128 octets) Mettre à sécher la cuve renversée sur un linge.
 
Sommaire  
 


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Mode opératoire Micrélec

6. E.M.G., réflexe achiléen [logiciel PHYNEURO] :

 
Schéma du montage 
  Principe de la Manip. 
 
 
 

EMG muscles antagonistes.

expbul2a.gif (128 octets) Mise en place des électrodes. 
 expbul3a.gif (272 octets)Placer les électrodes collantes à la base du SOLEAIRE, juste sous la partie la plus charnue du mollet (voir schéma). 
expbul3a.gif (272 octets) Relier les fils aux électrodes comme indiqué (BG/élect. sup., BD/élect. inf, JG/élect. lat.) et brancher le cordon en AMP1. 
expbul3a.gif (272 octets) Choisir calibre 2,5 V sur module/AMP1 ; Commutateur CHOIX sur position EMG ; mettre en marche le module (voyant rouge allumé). 
expbul3a.gif (272 octets) Placer 2 électrodes collantes sur la partie la plus charnue du JAMBIER ANTERIEUR, 8 à 10 cm au dessous du genou, à l'extérieur du tibia (voir schéma). 
expbul3a.gif (272 octets) Relier les fils aux électrodes comme indiqué (BG/élect. sup., BG/élect. inf, JG n'étant pas utilisé) et brancher ce 2ème cordon en AMP2.
expbul2a.gif (128 octets) Paramétrage du logiciel. 
 
expbul3a.gif (272 octets) Option 1 : MESURE du menu principal
expbul3a.gif (272 octets) Choix des paramètres : Durée=10 s ; Nombre stimulations=0 ; Déclenchement par le clavier ; Nombre enregistrements simultanés=2 ; valider
expbul3a.gif (272 octets) (c)A(libre) (A) : choisir 2,5 V (valeur affichée sur module)
expbul3a.gif (272 octets)Bouton décalage : placer flèches au tiers sup. et inf. écran.
expbul2a.gif (128 octets) Mesures possibles. [voir page principe]

expbul2a.gif (128 octets) Sauvegarde et impression.

expbul3a.gif (272 octets) Sauvegarde : option S(auve)
expbul3a.gif (272 octets) Impression : I(mprimer). Possibilité de légender les graphes et de modifier le titre (option N(otes)).
expbul2a.gif (128 octets) Procédure de fin de manipulation.
expbul3a.gif (272 octets) Enlever les piles du module électrophysiologie pour éviter qu'elles ne se déchargent.
 
 

Réflexe achiléen : [Brancher le marteau à réflexe sur prise DIN A d'ORPHY]

 
expbul2a.gif (128 octets) Mise en place des électrodes.
expbul3a.gif (272 octets) Laisser en place les électrodes sur le soléaire et leur branchement sur AMP1.
expbul2a.gif (128 octets) Paramétrage du logiciel.
expbul3a.gif (272 octets) Option 1 : MESURE du menu principal
expbul3a.gif (272 octets) Choix des paramètres : Durée=100 ms ; Nombre stimulations=0 ; Déclenchement avec le marteau ; Nombre enregistrements simultanés = 1.
expbul3a.gif (272 octets) Choisir calibre 2,5 V sur module/AMP1 ; Commutateur CHOIX sur position EMG ; mettre en marche le module (voyant rouge allumé).
expbul3a.gif (272 octets) Bouton décalage : placer la flèche au milieu de l'écran
expbul2a.gif (128 octets) Mesures. Enregistrement de la réponse électrique du soléaire lors d'un réflexe myotatique déclenché par une percussion sur le tendon d'achille. Lancer l'enregistrement [C(ommencer)] ; le démarrage ne se fera que lors de la percussion. (Enregistrer en Superposition).
1. Réflexe achiléen normal.
2. Réaction de Jendrassik (doigts crochetés étirés).
3. Réaction d'inhibition (contraction des muscles, pied en flexion).
expbul2a.gif (128 octets) Sauvegarde et impression.
expbul3a.gif (272 octets) Sauvegarde : option S(auve)
expbul3a.gif (272 octets) Impression : I(mprimer). Possibilité de légender les graphes et de modifier le titre (option N(otes)).
expbul2a.gif (128 octets) Procédure de fin de manipulation.
expbul3a.gif (272 octets) Enlever les piles du module électrophysiologie pour éviter qu'elles ne se déchargent.
 
Sommaire  
 


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Mode opératoire Micrélec

7. Catéchol ~catéchol-oxydase pomme de terre [logiciel Respor].

 
Schéma du montage 
  Principe de la Manip. 
 
 
 

Problème scientifique : comment une enzyme agit-elle en temps réel sur son substrat, quelles variations subit cette action sous l'influence de la concentration en enzyme du milieu. 

 
 

Principe :

 
expbul2a.gif (128 octets) Evaluer la vitesse de la réaction enzymatique grâce à la mesure d'une variation de [O2 ] du milieu réactionnel.
expbul2a.gif (128 octets) Des pommes de terre pelées et coupées brunissent rapidement si elles sont laissées à l'air. Conservées dans l'eau (à l'abri de l'oxygène), elles ne brunissent pas (ou beaucoup moins vite).
expbul2a.gif (128 octets) Ce noircissement est lié à une oxydation. Celle-ci est catalysée par une enzyme, la catéchol -oxydase, dont le substrat, le catéchol, se trouve dans un autre compartiment cellulaire (dans un tissu non lésé). La réaction enzymatique est la suivante :
 
 
Catéchol + ½ O2   =========> Benzoquinone  + H2O
1 mole  0,5 mole 1 mole
C6H6O2 C6H4O2
 
 
 
expbul2a.gif (128 octets) Le catéchol est incolore, alors que la benzoquinone a une couleur qui varie du jaune orangé au brun suivant sa concentration. Cette réaction consomme du O2
expbul2a.gif (128 octets) La sonde oxymétrique mesure en temps réel la variation de [O2] du milieu. Il est donc possible de suivre la consommation de O2 grâce à cette sonde. Pour 1 mole de O2 consommée, il y a 2 moles de substrat dégradé. La vitesse de la réaction est donc proportionnelle à la quantité de O2 consommée.
 
 

Préparation des solutions

expbul2a.gif (128 octets) Solution de catéchol : solution décimolaire [11,1 g.litre-1], solution à conserver dans un flacon plein et hermétiquement bouché (éviter tout contact avec O2).  
N Se rincer les mains après toute manipulation de cette solution, car le catéchol est un irritant.  

expbul2a.gif (128 octets) Extraction de la Catéchol-oxydase : elle se fait sur la pomme de terre. Eplucher une pomme de terre en faisant (une fois n'est pas coutume !) de grosses épluchures. Extraire le jus de la pomme de terre à la centrifugeuse à fruit. Filtrer le jus obtenu pour éliminer l'amidon (ou laisser décanter quelques minutes). Placer le filtrat au réfrigérateur (blocage de l'activité enzymatique) si préparation anticipée.  
 

Mode opératoire.

expbul2a.gif (128 octets) Paramétrage du logiciel. 
 
expbul3a.gif (272 octets)Lancer le logiciel RESPOR. Option MESURES du menu principal . 
expbul3a.gif (272 octets)Durée : 2 min. ; largeur histogrammes : valider ; mesure O2 : O puis confirmer (enlever l'histogramme (H) 
 
expbul2a.gif (128 octets) Première mesure. 
expbul3a.gif (272 octets) Préparer une seringue à injection avec 1 ml de solution de catéchol-oxydase [extrait de pomme de terre] (la remplir en chassant soigneusement l'air du cathéter). 
expbul3a.gif (272 octets) Préparer le réacteur en y mettant la quantité adéquate (cf tableau) de solution de catéchol, introduire le turbulent magnétique et brancher la seringue sur l'aiguille du réacteur. 
expbul3a.gif (272 octets) Lancer l'agitation [agitation la plus faible possible] puis, à l'aide du bouton décalage, placer le curseur "O2 " vers le haut de l'écran. 
expbul3a.gif (272 octets) Lancer la mesure [C(ommencer)] lorsque la valeur O2 affichée (position du curseur) s'est stabilisée, et injecter (lentement) immédiatement la quantité adéquate (cf tableau) de "jus de pomme de terre". 
expbul3a.gif (272 octets) Sauvegarder sur disque : option S(auve), entrer PS5_**** (identifier résultat par initiales ou début prénom).
expbul2a.gif (128 octets) Deuxième mesure et suivantes. 
expbul3a.gif (272 octets)expbul3a.gif (272 octets) Bien rincer le réacteur, puis reprendre exactement le mode opératoire précédent, en utilisant la même vitesse d'agitation, et en modifiant seulement le volume d'extrait à injecter [voir tableau ci-dessous]. Avant de lancer chaque mesure, ramener la position du curseur à sa potition initiale de la mesure 1. 
expbul3a.gif (272 octets) A la fin de chaque mesure sauvegarder sur disque [option S(auve)] en entrant le même nom de fichier (pour écraser l'ancien). Attention : le logiciel respor ne permet de superposer que 4 mesures. Il faut donc sauvegarder les mesures 5 et 6 dans un 2ème fichier, sous un nom différent.
 
Volumes extrait à injecter pour \ Mesures
1
2
3
4
5
6
Bioréacteur Jeulin (5ml)
0,05
0,10
0,15
0,20
0,25
0,30
Cytoréacteur Pierron / réacteur "Chatillon" 10 ml
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
0,6
Réacteur 20 ml
0,2
0,4
0,6
0,8
1,0
1,2
[ENZYME] (en unités arbitraires)
1
2
3
4
5
6
 

expbul2a.gif (128 octets) Sauvegarde et impression. 

expbul3a.gif (272 octets) Sauvegarde : option S(auve) 
expbul3a.gif (272 octets) Impression  
- Légende des courbes : option N(otes). Entrer $1$1$1$1$1$1 [1] $2$2$2$2$2$2 [2] puis valider ; recommencer ($3..$4) pour les deux autres lignes de légende. Changer le titre (cf titre feuille 1). Ne pas oublier de sauvegarder une nouvelle fois avant d'imprimer. 
- Choisir l'option I(imprime) après avoir réglé (si nécessaire) le boitier de connexion sur votre poste et placé du papier dans l'imprimante. Entrer 2 lignes de commentaire et imprimer.
 
 

Procédure de fin de manipulation

    expbul2a.gif (128 octets) Sortir du logiciel RESPOR (Echappement puis option 7) ; option Terminer ranger les têtes ; éteindre Interface, imprimante et U.C. 

expbul2a.gif (128 octets) Démonter le réacteur, rincer soigneusement piston et cuve ou réacteur [ne pas perdre le turbulent], ainsi que les seringues utilisées. Le matériel doit être, en fin de manipulation, dans l'état où vous l'avez trouvé en début de séance.
 
 

Exploitation des résultats :

expbul2a.gif (128 octets) Déterminer la vitesse initiale maximum pour chacune des concentrations utilisées [la vitesse de la réaction correspond à la quantité de substrat transformé (ici à la consommation de O2) par unité de temps, donc à la pente des courbes obtenues. Calculer ces pentes et vérifier que les valeurs affichées sur l'écran sont bien proportionnelles aux valeurs que vous avez trouvées.  
expbul2a.gif (128 octets) Construire la courbe de variation de la vitesse initiale en fonction de la concentration du milieu en enzyme.  
expbul2a.gif (128 octets) Etudier cette courbe et élaborer une hypothèse d'explication basée sur vos connaissances actuelles. 
 
 
Sommaire  
 


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Mode opératoire Micrélec

8. Glucose ~glucose-oxydase [logiciel Respor].

 
Schéma du montage 
  Principe de la Manip. 
 
 
 

Objectif : quelle est l'action en temps réel d'une enzyme sur son substrat, quelles variations subit cette action sous l'influence de [substrat] du milieu (ou des facteurs [enzyme], pH...). 

 
 

Principe :

 
expbul2a.gif (128 octets) La Glucose-Oxydase catalyse l'oxydation du glucose en Gluconolactone selon l'équilibre :
 
C6H12O6 + H2O + O2   <=========> Gluconolactone  + H2O2
1 mole  1 mole
 
expbul2a.gif (128 octets) La sonde Oxymétrique mesure la variation de [O2] dans le milieu, donc la vitesse de cette consommation. Cette vitesse est l'indicateur de la vitesse de la réaction d'oxydation. La vitesse de réaction correspond à la masse de substrat transformé par unité de temps. C'est la raison pour laquelle le logiciel demande le volume du milieu réactionnel, ainsi que la concentration en substrat de ce milieu.
expbul2a.gif (128 octets) La superposition de mesures réalisées avec des solutions de glucose de concentrations croissantes permet de comparer les vitesses initiales de réaction.
 
 

Solutions :

 
expbul2a.gif (128 octets) Glucose-Oxydase (voir fiche préparation)
expbul2a.gif (128 octets) Glucose / solution mère : M/10 , soit [18 g.l-1].
expbul2a.gif (128 octets) Solutions de GLUCOSE à tester : (1) [10000 µm.l-1] ; (2) [5000 µm.l-1] ; (3) [2500 µm.l-1] ; (4) [1000 µm.l-1] ; (5) [500 µm.l-1] ; (6) [250 µm.l-1] ; (7) [100 µm.l-1]
 
 

Mode opératoire :

 
 
Absolument identique au précédent ==>   Se reporter  au paragraphe 7.
 
 
Mesures
1/Témoin
2
3
4
5
6
Volume extrait à injecter
0
0,05
0,10
0,15
0,20
0,25
[enzyme] à entrer (u. arbitraires)
0
1
2
3
4
5
 
 
Sommaire  
 


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Mode opératoire Micrélec

9. Paramétrage du logiciel REGORPHY [REGressi sous ORPHY] :

expbul2a.gif (128 octets) Le logiciel REGRESSI est un logiciel général d'acquisition de données, permettant d'utiliser pratiquement tous les capteurs Micrélec reliés à l'interface ORPHY GTS (d'où le nom du logiciel : regorphy)..
expbul2a.gif (128 octets) Comme tous les logiciels d'acquisition de données (Labo de Langage & Informatique, Actilab de Jeulin...), son utilisation dans un contexte particulier nécessite un paramétrage adapté.
expbul2a.gif (128 octets) Dans le cadre de l'Ex.A.O. Biologie, ce logiciel est utilisé avec le module Photocolor, module de cinétique enzymatique.

expbul2a.gif (128 octets) Matériel Ex.A.O.

expbul3a.gif (272 octets) Module photocolor à brancher sur prise B de l'interface ORPHY GTS (en EA4).
expbul3a.gif (272 octets) Logiciel regressi (logiciel d'acquisition de données sous ORPHY) : REGORPHY.
expbul2a.gif (128 octets) Paramétrage du logiciel.
expbul3a.gif (272 octets) Lancer REGORPHY. L'écran du Tableur apparaît.
expbul3a.gif (272 octets) Menu Fichier / ORPHY GTS. L'écran Mesure apparaît alors.
expbul3a.gif (272 octets) Menu Abscisse : sélectionner temps
expbul3a.gif (272 octets) Menu Voies : sélectionner 1 Voie ; Voie A = 4 (EA4 correspond à prise B interface)
expbul3a.gif (272 octets) Menu Voies / Etalonne : choisir étalonnage Non interactif
expbul3a.gif (272 octets) Entrer les valeurs suivantes :
 
tension mesurée grandeur physique
0 0
0,1 (100.00m) 100
 
Les tensions mesurées varient entre 0 et 0,1 (limite de fonctionnement de EA4). A la tension 0 on attribue la valeur physique 0, et à 0,1 on attribue le maximum de l'ordonnée, soit 100.

expbul3a.gif (272 octets) Menu Enregistre / Durée : entrer la durée indiquée pour la manipulation à effectuer, soit :

- 120 s [peroxyde d'hydrogène / peroxydase du radis],
- 180 s [catéchol / pomme de terre],
- 300 s [amylase / empois d’amidon].
expbul3a.gif (272 octets) Menu Déclenche : sélectionner le clavier.
En ordonnée, le 0 correspond à une transmission nulle de lumière, donc à une absorption maximale. Le 100 correspond à une transmission maximale, donc à une absorption nulle.
expbul3a.gif (272 octets) Il est possible de sauvegarder chaque fichier de configuration [Option Réglage / Sauve] sous un nom du genre confot_* (configuration du module photocolor) et de charger ce fichier avant la manipulation [Réglage / Charge]. Cela évite d'avoir à paramétrer chaque fois le logiciel. .
expbul2a.gif (128 octets) Première mesure .
expbul3a.gif (272 octets) Lorsque la cuve sera en place, la mesure sera déclenchée par une pression sur la barre "espace". .
expbul3a.gif (272 octets) A la fin de la mesure, valider. Le message "Acquisition page 1 terminée Oui/Non)" apparaît. Taper O.
expbul3a.gif (272 octets) Si une autre mesure n'est pas envisagée, touche Echap pour sortir de l'écran Mesure et revenir dans l'écran Tableur.
expbul2a.gif (128 octets) Mesure(s) suivante(s) .
expbul3a.gif (272 octets) Procéder comme précédemment ; à la fin de chaque mesure, passer à la page suivante. A la fin de la dernière mesure, touche Echap pour revenir à l'écran Tableur. Cet écran présente les résultats sous forme de tableaux de résultats, et permet de créer les graphes correspondants [voir affichage des graphes obtenus].
expbul2a.gif (128 octets) Sauvegarde des résultats.
expbul3a.gif (272 octets) Option Fichier / Sauve. Donner un nom de fichier (8 caractères maximum, sous espace ni caractères interdits). Les résultats sont alors sauvegardés sur disque, et pourront éventuellement être récupérés ultérieurement (option Fichier / Charge / Ã ).
expbul2a.gif (128 octets) Affichage des graphes obtenus.
expbul3a.gif (272 octets) Option Graphe du menu Tableur, puis Superpose / Pages.
expbul3a.gif (272 octets) Sélectionner les pages qu'on veut faire afficher sous forme de courbes (touches de direction puis barre espace pour sélectionner, enfin à ). Touche F5 pour afficher la ou les courbes désirées en superposition.
expbul3a.gif (272 octets) L'option Zoom. permet, si l'échelle d'affichage ne convient pas, de modifier celle-ci. Sélectionner Manuel et modifier max et min d'ordonnée. On peut aussi réduire la durée d'affichage en modifiant max d'abscisse.
expbul2a.gif (128 octets) Impresssion des résultats.
expbul3a.gif (272 octets) Dans l'écran d'affichage des graphes, sélectionner Imprime puis confirmer.
expbul2a.gif (128 octets) Calcul de la pente (vitesse initiale).
expbul3a.gif (272 octets) Il existe dans le menu de l'écran Tableur l'option Calcul. Dans le menu Calcul, sélectionner Régression Linéaire. S'affiche alors un écran de résultats dont la pente. Mais attention, il s'agit de la pente moyenne, et non d'une pente maximale.
 
 
Sommaire  
 


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Mode opératoire Micrélec

10. Gaïacol ~peroxydase de radis noir  [logiciel Regressi] :

 
Schéma du montage 
  Principe de la Manip. 
 
 
 

Objectifs :

 
expbul2a.gif (128 octets) Evaluer la vitesse de la réaction enzymatique grâce à un photo colorimètre.
expbul2a.gif (128 octets) Déterminer comment une enzyme agit en temps réel sur son substrat, quelles variations subit cette action sous l'influence de la [enzyme] du milieu (ou des facteurs [substrat], pH...).
 
 

Principe :

 
expbul2a.gif (128 octets) Les oxydations cellulaires produisent du peroxyde d'hydrogène (eau oxygénée H2O2) qui est nocif pour les cellules. Celles-ci possèdent une enzyme, la catalase (ou peroxydase) qui utilise H2O2 pour oxyder ses substrats selon la réaction :
2 H2O2 + Rred =========> 2 H2O + Rox

expbul2a.gif (128 octets) Si R est du gaïacol (ou méthoxyphénol), il va subir une oxydation qui va le faire changer de couleur. Le gaïacol réduit est incolore ; oxydé il est brun-rouge. Il est donc possible de suivre la réaction par photo colorimétrie.

 
 

Solutions :

 
expbul2a.gif (128 octets) Solution de gaïacol. Diluer le produit au millième (1 ml de produit pour 1 litre d'eau distillée).
expbul2a.gif (128 octets) Solution de peroxyde d'hydrogène. Prendre de l'eau oxygénée à 10 volumes et la diluer au 250ème (1 ml d'eau oxygénée pour 250 ml d'eau distillée).
 
 

Matériel biologique [Extraction de la peroxydase] 

 
expbul2a.gif (128 octets) Elle se fait sur du radis noir (raifort, ou sur des radis rouges). Placer le radis, l'eau distillée et la verrerie au réfrigérateur 1 heure avant l'extraction [blocage des réactions enzymatiques]. Peler un (ou plusieurs) petit(s) radis et extraire le jus à la centrifugeuse. L'extrait est recueilli dans un bêcher.
expbul2a.gif (128 octets) Filtrer et/ou centrifuger pour obtenir un extrait assez clair. Diluer à 100 % dans de l'eau distillée. Congeler éventuellement pour une utilisation ultérieure.
 
 

Matériel nécessaire :

 
expbul2a.gif (128 octets) Matériel Ex.A.O. : module photocolor à brancher sur prise B de l'interface ORPI IY GTS (en EA4), logiciel REGRESSI (Regorphy).

expbul2a.gif (128 octets) Matériel non Ex.A.O. : cuves de photo colorimétrie, 2 seringues 5 ml, 1 seringue 1 ml pour injection....

 
 

Mode opératoire : 

 
expbul2a.gif (128 octets) Paramétrage du logiciel. [Voir fiche de paramétrage du logiciel REGORPHY]
expbul3a.gif (272 octets) Menu enregistre / Durée: entrer 60 s. (pour cette manipulation).
expbul2a.gif (128 octets) Préparation du tube de mesure.
expbul3a.gif (272 octets) Préparer une seringue de 1 ml d'extrait de radis/peroxydase.
expbul3a.gif (272 octets) Placer dans un tube de photocolorimétrie (cuve à faces parallèles) 1,5 ml de solution de H2O2 et 1,5 ml de solution deGaïacol.
expbul3a.gif (272 octets) Introduire la cuve dans le module photocolor et mettre en place le couvercle.
expbul3a.gif (272 octets) L'injection de l'extrait (volume correspondant à la mesure) se fera par le trou du couvercle.
 
Mesures
1
2
3
4
5
6
Volume extrait à injecter
0 (témoin)
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
[enzyme] (U. arbitraires)
0
1
2
3
4
5
expbul2a.gif (128 octets) Mesures.
expbul3a.gif (272 octets) Lorsque la cuve sera en place, la mesure sera déclenchée par une pression sur la barre "espace". Injecter l'extrait au temps 10 s.
expbul3a.gif (272 octets) Pour superposer les mesures. se référer au dossier du logiciel REGRESSI.
expbul2a.gif (128 octets) Sauvegarde et impression des résultats. [Voir fiche paramétrage du logiciel REGORPHY]
expbul3a.gif (272 octets) Sortir du logiciel REGORPHY (Echap puis Fichier / Quitter) ; option Terminer ranger les têtes ; éteindre Interface, imprimante et U.C.
expbul3a.gif (272 octets) Enlever la cuve et la rincer soigneusement. En cas d'inutilisation prolongée, enlever la pile du module photocolor.
 
 

Procédure de fin de manipulation :

 
 

Exploitation des résultats :

 
expbul2a.gif (128 octets) Déterminer la vitesse initiale maximum pour chacune des concentrations utilisées [la vitesse de la réaction correspond à la quantité de substrat transformé par unité de temps, donc à la pente des courbes obtenues Calculer ces pentes et vérifier que les valeurs affichées sur l'écran sont bien proportionnelles aux valeurs que vous avez trouvées.
expbul2a.gif (128 octets) Construire la courbe de variation de la vitesse initiale en fonction de la concentration du milieu en enzyme.
expbul2a.gif (128 octets) Etudier cette courbe et élaborer une hypothèse d'explication basée sur vos connaissances actuelles.
 
Sommaire  
 


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Mode opératoire Micrélec

11. Photosynthèse  [logiciel PHOTOR] :

 
Schéma du montage 
  Principe de la Manip. 
 
 
 

Préparation des suspensions :

 
expbul2a.gif (128 octets) Végétaux macroscopiques : Découper les feuilles d'élodée en petits fragments, ou enlever les racines des lentilles ; placer les fragments de feuille d'élodée ou les lentilles dans le réacteur, puis injecter dans celui-ci 5/20 ml d'eau.

expbul2a.gif (128 octets) Suspension de chlorelles : la suspension utilisée provient d'une souche "importée" de la région parisienne et "repiquée" au cours de stages de formation. Cette suspension contient des chlorelles, mais aussi des bactéries autotrophes. Sa conservation ne pose aucun problème, si on maintient le niveau de l'eau et ajoute, une fois par mois, quelques ml de solution de Knop.
Si elle est conservée dans un cristallisoir, couvrir la surface avec un papier alu pour éviter que ne se forme un voile bactérien.

 
 

Mode opératoire :

 
expbul2a.gif (128 octets) Paramétrage du logiciel.
expbul3a.gif (272 octets) Lancer le logiciel PHOTOR. * Option 1 : MESURES. - Durée = 10 mn ; largeur histogramme : valider Mesure O2 (O/N) : O ; confirmer O. Utilisation de filtres colorés = N.
expbul2a.gif (128 octets) Mesure.
expbul3a.gif (272 octets) Mettre en place la sonde oxymétrique, puis lancer l'agitation (si utilisation d'un bioréacteur, ne pas oublier de mettre cette sonde en place en premier !)
expbul3a.gif (272 octets)Allumer la lampe [celle-ci devra rester allumée durant toute la manipulation], et la placer le plus près possible du réacteur.
expbul3a.gif (272 octets)Fixer la sonde luxmètre, le capteur tourné vers la lampe,
expbul3a.gif (272 octets) A l'aide du bouton décalage du module oxymétrique, placer le curseur au 1/3 inférieur de l'écran.
expbul3a.gif (272 octets) Ne lancer la mesure qu'au bout de 2/3 min. C(ommencer) pour lancer la mesure.
expbul3a.gif (272 octets) Au bout d'une minute, reculer la lampe de 5 cm, puis la reculer tputes les trente secondes jusqu'à la neuvième minute. Placer alors le cache sur le réacteur pour avoir l'obscurité. A chaque éloignement de la lampe, placer un R(epère).
expbul2a.gif (128 octets) Sauvegarde et impression des résultats.
expbul3a.gif (272 octets) Sauvegarde : optionS(auve) ; changement de répertoire : N ; donner un nom de fichier de huit caractères, sans espace
expbul3a.gif (272 octets) Impression : option I(mprime) pour éditer le fichier.
 
 

Procédure de fin de manipulation :

expbul2a.gif (128 octets) Sortir du logiciel PHOTOR (Echappement puis option 7) ; éteindre Interface, imprimante et U.C. 

expbul2a.gif (128 octets) Démonter le réacteur, rincer soigneusement piston et cuve ou réacteur [ne pas perdre le turbulent]. Le matériel doit être, en fin de manipulation, dans l'état où vous l'avez trouvé en début de séance. 
 
 
Sommaire  
 


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Mode opératoire Micrélec

12. Spectre d'absorption de la chlorophylle [logiciel CCDORPHY] :

 
Schéma du montage 
 
 
 

Matériel à préparer :

 
expbul2a.gif (128 octets) Matériel Ex.A.O.
expbul3a.gif (272 octets) Interface ORPHY GTS (branchée)
expbul3a.gif (272 octets) Spectrophotocolorimètre Micrélec.
expbul2a.gif (128 octets) Matériel non Ex.A.O.
expbul3a.gif (272 octets) Nécessaire pour extraction de la chlorophylle. [mortier, pilon, sable, alcool à 70°, appareil à filtration, Erlenmeyer de 100 cc, cuvette à dissection], Cuves à faces parallèles (photocolorimétrie).
 
 

Extraction de la chlorophylle :

expbul2a.gif (128 octets) Utiliser des épinards, de l'herbe (gazon), des orties... Extraire 2 ou 3 solutions, pour étude comparative. 
expbul2a.gif (128 octets) Broyer en présence de sable des fragments de feuilles dans un mortier, puis filtrer soigneusement (la solution obtenue doit être limpide). La quantité nécessaire dépend du type de cuve à faces parallèles utilisée. On peut aussi hacher les feuilles à l'aide d'un mini-hachoir et ne pas utiliser de sable. 
 
 

Installation du logiciel :  

Configuration minimum nécessaire 
pour installer le logiciel CCDORPHY
Type ordinateur 
Disque dur 
Souris 
Ecran
PC AT 80.386
Oui
Recommandée
VGA couleurs
 

1. Modification du fichier Autoexec.bat (si nécessaire) 

- La souris est vivement recommandée pour utiliser ce logiciel, et il faut qu'elle soit reconnue par le système dès le la mise sous tension de l'ordinateur. Si tel n'est pas le cas, il faut modifier ce fichier. 
- Editer ce fichier (à l'aide de MENUDT / Outil disque / Editer un fichier texte, à l'aide de EDIT du DOS, ou avec un traitement de texte, en n'oubliant pas, dans ce dernier cas, de sauvegarder le fichier modifié au format DOS (Texte). Vérifier que ce fichier contient les commandes de lancement suivantes : 
C:\MOUSE\MOUSE
C:\DOS\GRAPHICS

Sinon les ajouter après la dernière ligne des "Path...".

2. Installation du logiciel 
- Créer un sous répertoire SPECTRO dans le répertoire contenant les logiciels d'Ex.A.O., puis copier tous les fichiers de la disquette dans ce sous répertoire. Utiliser par exemple MENUDT / Créer un répertoire puis Copier un fichier (ou entrer Copy A:\*.* C:\biologie\spectro).
 

Etalonnage lors de la première utilisation : 

expbul2a.gif (128 octets) Lancement du logiciel. 
expbul3a.gif (272 octets) Se placer dans le répertoire contenant le programme, et entrer au clavier CCDORPHY à 
expbul3a.gif (272 octets) Appuyer sur barre espace puis deux fois sur touche Echap pour accéder au menu principal.
expbul2a.gif (128 octets) Etalonnage. 
 
 
expbul3a.gif (272 octets) Brancher le module sur l'interface (entrée D), mettre le module sous tension, et placer le filtre vert dans la fente du module. 
expbul3a.gif (272 octets) Sélectionner Acquisition / Etalonner le spectro (en cliquant deux fois sur le bouton gauche de la souris). 
expbul3a.gif (272 octets) Activer l'icône SOLVANT (double clic gauche). Activer l'icône l . Sélectionner Oui / Etalonnage sur ce spectre. 
expbul3a.gif (272 octets) Placer la mire sur pic "525 nm", et vérifier que la valeur affichée dans la fenêtre est bien 525, sinon la corriger, puis valider. 
expbul3a.gif (272 octets) Cliquer sur bouton droit de la souris pour quitter, puis cliquer sur l'icône FIN . 
expbul3a.gif (272 octets) Option Bureau / Sauvegarder la configuration. Cet étalonnage sera pris en compte lors des manipulations ultérieures.  
 
 
 
 

Mode opératoire :

 
expbul2a.gif (128 octets) Préparer la solution de pigments comme indiqué précédemment ; verser 4 ml de solvant pur dans une cuve à photo colorimétrie, et 4 ml de solution dans une autre.
expbul2a.gif (128 octets) Sélectionner Acquisition / Relever un spectre / Spectre d'absorption

expbul2a.gif (128 octets) Obtention de la courbe de référence en lumière blanche :

expbul3a.gif (272 octets) Placer l'écran opaque dans la fente du module, puis activer l'icône ZERO Valider.
expbul3a.gif (272 octets) Enlever l'écran opaque et placer la cuve contenant le solvant dans le module. Activer l'icône SOLVANT
expbul3a.gif (272 octets) Modifier le solvant. Valider.
expbul2a.gif (128 octets) Obtention du spectre d'absorption :
expbul3a.gif (272 octets) Placer la cuve contenant la solution de pigments dans le module, puis activer l'icône SOLUTE. Valider.
expbul2a.gif (128 octets) Impression et sauvegarde :
expbul3a.gif (272 octets) Sauvegarde : cliquer sur icône FIN pour revenir au menu principal. Sélectionner Fichier / Sauver dans un fichier / Nom de fichier (8 caractères sans espace).
expbul3a.gif (272 octets) Impression : cliquer sur l'icône IMPRIMANTE et suivre les indications apparaissant à l'écran.
 
 

Procédure de fin de manipulation :

 
expbul2a.gif (128 octets) Sortir du logiciel CCDORPHY  ; éteindre Interface, imprimante et U.C.
expbul2a.gif (128 octets) Rincer soigneusement tout le matériel utilisé. Le matériel doit être, en fin de manipulation, dans l'état où vous l'avez trouvé en début de séance.
 
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Mode opératoire Micrélec

13. Gibérelline (Croissance végétale - Première S)
 
 

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